DMEM 高糖 培養基在細胞培養過程中的使用:
1.細胞復蘇后的換液
-當從凍存狀態復蘇細胞后,細胞接種到含有適量RPMI-1640培養基的培養瓶或培養皿中。一般接種密度根據細胞種類和實驗目的有所不同,例如對于貼壁細胞,每平方厘米可能需要接種數千個細胞。
-細胞接種后,將其放入37℃、CO2培養箱中培養。在細胞復蘇后的24小時內,需要觀察細胞的貼壁情況和狀態。當細胞貼壁后(一般貼壁細胞在接種后幾個小時內開始貼壁),可以更換新鮮的RPMI-1640培養基,以去除復蘇過程中可能產生的一些對細胞有害的物質,如凍存保護劑二甲基亞砜(DMSO)。
2.常規換液
-根據細胞的生長速度和代謝情況確定換液頻率。一般來說,對于生長較快的細胞,可能需要每2-3天換液一次;對于生長較慢的細胞,可以每3-4天換液一次。
-換液時,小心地吸出舊的培養基,注意不要吸到細胞。然后加入適量的新鮮RPMI-1640培養基,一般以覆蓋細胞單層為宜。例如,對于一個T-25培養瓶中的細胞,每次可以加入3-5ml的培養基。
3.傳代培養
-當細胞生長達到一定的匯合度(例如,貼壁細胞匯合度達到80-90)時,需要進行傳代。首先棄去舊的培養基,用適量的磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗細胞,以去除殘留的培養基和細胞代謝產物。
-加入適量的EDTA消化液(一般根據培養瓶或培養皿的底面積加入適量,如T-25培養瓶可以加入0.5-1ml),將細胞消化下來。消化時間根據細胞種類和活性而定,一般在室溫下消化幾分鐘,直到細胞變圓、開始脫落。
DMEM 高糖 培養基